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        原代細胞分離與培養

        更新時間:2021-09-02點擊次數:1930

        原代細胞(primary cell)是指從生物體獲取細胞直接培養。通常,把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。由于細胞剛從活體組織分離出來,因此原代細胞更接近于生物體內的生活狀態,且生物性狀尚未發生很大改變。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段,同時也為以后傳代培養創造條件。

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        原代細胞的分離與培養

        常用的原代細胞培養方法有組織塊培養分散組織培養。

        組織塊培養:是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上,加入培養基后進行培養。

        組織塊培養法是常用的、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。將組織塊剪切成小塊后,接種于培養瓶,組織小塊貼壁24h或更長時間后,細胞就從組織四周游出。但由于在反復剪切和接種過程中對組織塊的損傷,并不是每個小塊都能長出細胞。用于組織塊培養的培養瓶可根據不同細胞生長的需要作適當處理,如:預先涂以鼠尾膠原薄層,以利于上皮樣細胞等的生長。

        分散組織培養:是將組織塊從機體中取出離散成單個細胞,置于合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。分散組織培養也是常用的一種原代細胞培養方法,通常用機械法或化學法將組織塊分散為單細胞。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性較好的游離細胞,經典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細胞間的結合物,或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細胞互相粘著所依賴的Ca2+,再經機械輕度振蕩,使之成為單細胞。

        注意事項:

        1. 取材的組織要盡快培養。如若不能及時培養,可將組織浸泡于培養液內,放置于冰浴或4℃冰箱中,如果組織塊很大,應切成1cm3以下的小塊再低溫保存,但時間不能超過24h。

        2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區域取材,可用含500~1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5~10min,或用10%達克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養。

        3. 組織塊不易貼壁,可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

        4. 原代培養的1~2d內要特別注意觀察是否有細菌、真菌、霉菌的污染,一旦發現,要及時清除。

        原代細胞的應用前景

        原代細胞在細胞學研究、遺傳學研究、腫瘤研究、藥物篩選、細胞移植、類器官培養等眾多研究領域備受歡迎,且原代細胞在生物醫藥領域的應用市場前景廣闊。

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